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ELISA試劑盒常見問題解析
更新時間:2025-10-13瀏覽:160次

  ELISA試劑盒常見問題解析

  1. 標準曲線線性不佳?

  可能原因?:

  標準品溶解不充分或稀釋錯誤(建議使用新鮮配置的母液)。

  孵育時間/溫度不穩(wěn)定(需嚴格控制在37℃±1℃)。

  洗板不jing(建議使用洗板機,確保每孔注滿洗滌液)。

  解決方案?:

  標準品分裝后-20℃保存,避免反復凍融。

  使用前充分震蕩混勻,梯度稀釋時更換槍頭。

  2. 顯色異常(顏色過淺或過深)?

  可能原因?:

  底物溶液失效(TMB避光保存,開封后1個月內(nèi)用完)。

  終止液添加時間不一致(建議顯色后5分鐘內(nèi)終止)。

  樣本濃度過高(需預實驗確定稀釋倍數(shù))。

  解決方案?:

  檢查底物是否出現(xiàn)藍色沉淀(變質(zhì)標志)。

  使用酶標儀讀取OD值,避免肉眼判斷誤差。

  3. 重復性差(板內(nèi)/板間變異大)?

  可能原因?:

  加樣量不準(建議使用校準后的移液器,避免氣泡)。

  孔間污染(加樣時槍頭勿觸碰孔壁)。

  孵育環(huán)境不均(使用恒溫搖床或水浴)。

  解決方案?:

  設置復孔(至少3孔/樣本),CV值應<15%。

  4. 高背景值?

  可能原因?:

  封閉不充分(建議使用5%脫脂奶粉或BSA封閉)。

  一抗/二抗?jié)舛冗^高(需優(yōu)化抗體稀釋比例)。

  洗滌液殘留(洗板后拍干,避免交叉污染)。

  解決方案?:

  增加封閉時間(37℃ 1小時或4℃過夜)。

  5. 樣本OD值超出標準曲線范圍?

  可能原因?:

  樣本基質(zhì)干擾(如高脂、溶血樣本需預處理)。

  樣本稀釋倍數(shù)不足(建議預實驗確定線性范圍)。

  解決方案?:

  使用樣本稀釋液(含1% BSA或0.1%吐溫-20)。

  6. 酶標儀讀數(shù)異常?

  可能原因?:

  濾光片選擇錯誤(TMB檢測需450nm,OD校正570nm)。

  孔底氣泡或污染(讀數(shù)前輕震板)。

  解決方案?:

  定期校準酶標儀,使用空白孔調(diào)零。

  操作注意事項?

  試劑平衡?:所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘。

  時間控制?:顯色反應時間嚴格按說明書(通常10-15分鐘)。

  數(shù)據(jù)記錄?:及時記錄OD值,避免終止液揮發(fā)后讀數(shù)。

  若問題持續(xù),建議聯(lián)系供應商提供技術復核(如抗體效期驗證或樣本檢測)。

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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