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elisa試劑盒加入終止液后沒(méi)有立即測(cè)定影響大嗎?
在ELISA實(shí)驗(yàn)中，加入終止液后未立即測(cè)定可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生一定影響，具體取決于以下幾個(gè)因素：
1. 終止液的作用
終止液)的作用是終止酶(如HRP)與底物(如TMB)的反應(yīng)，使顯色反應(yīng)停止。一旦終止液加入，顏色會(huì)迅速穩(wěn)定(如TMB從藍(lán)色變?yōu)辄S色)。
2. 延遲測(cè)定的潛在影響
顏色穩(wěn)定性：大多數(shù)ELISA試劑盒(如TMB底物體系)在終止后顏色可穩(wěn)定數(shù)小時(shí)(通常2-4小時(shí)，具體參考說(shuō)明書(shū))。但長(zhǎng)時(shí)間放置(如超過(guò)24小時(shí))可能導(dǎo)致吸光度(OD值)略微下降或背景升高。
環(huán)境因素：如果板子暴露在強(qiáng)光或高溫下，可能加速顏色變化，導(dǎo)致結(jié)果偏差。
特殊底物：某些底物(如OPD)在終止后穩(wěn)定性較差，需盡快檢測(cè)。
3. 建議操作
立即測(cè)定最佳：大多數(shù)說(shuō)明書(shū)建議終止后10-30分鐘內(nèi)完成讀數(shù)，以確保準(zhǔn)確性。
短期延遲(1-2小時(shí))：若無(wú)法立即檢測(cè)，可將反應(yīng)板避光保存于室溫(避免低溫導(dǎo)致沉淀)，通常影響較小。
長(zhǎng)期延遲：如需長(zhǎng)時(shí)間保存，建議先讀取數(shù)據(jù)后再存檔樣本，避免依賴延遲測(cè)定。
4. 驗(yàn)證方法
如果不確定影響程度，可進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
立即測(cè)定一組孔，延遲測(cè)定另一組(如1小時(shí)、2小時(shí)后)，觀察OD值變化趨勢(shì)。
結(jié)論：短時(shí)間延遲(如1小時(shí)內(nèi))通常影響不大，但應(yīng)盡量按說(shuō)明書(shū)要求操作，避免人為誤差。若延遲較久，需評(píng)估試劑盒的穩(wěn)定性或優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程。
注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說(shuō)明，可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。
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